Маҷмӯи PCR Blood Direct

Тақвияти босуръати генҳои мақсаднок бевосита бо истифода аз хун ҳамчун қолаб бе истихроҷ.

Ин маҷмӯа полимеразаи зидди ингибитории генетикии муҳандисиро барои самаранок такмил додани генҳои як нусха дар геноми инсон қабул мекунад. Системаи буферии хуб оптимизатсияшуда дар ин маҷмӯа ба полимераза кӯмак мекунад, ки ба ҷилавгирӣ аз ингибиторҳои ПТР сахт муқовимат кунад ва аз ин рӯ метавонад мустақиман ДНК -ро бо истифода аз хун ва ҳуҷайраҳои фарҳангӣ ҳамчун қолабҳо тақвият диҳад. Ин маҳсулот осон кор мекунад ва қадамҳои мураккабро ба мисли тозакунии ДНК ё пешакӣ коркард намуна талаб намекунад.
Ин маҷмӯа ҳамчун 2 × MasterMix таъмин карда шудааст ва реаксияро бо илова кардани қолаби хун ва праймерҳои муайянкунандаи мувофиқ иҷро кардан мумкин аст. Онро метавон дар ҳуҷайраҳои фарҳангии ширхӯрон, ба монанди одамон, мушҳо, хукҳо, говҳо ва дигар намудҳо, инчунин хуни тару тоза ё 4 ℃ криоконсервшуда, антикоагулянт (EDTA, цитрат, гепарин), лахтаҳои хуни моеъ ва доғҳои хуни хушк истифода бурдан мумкин аст. дар кортҳои тиҷоратии Whatman 903 ва FTA Elute нигоҳ дошта мешаванд.

Гурба Не	Андозаи бастабандӣ
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

Ба мо почтаи электронӣ фиристед

Тафсилоти маҳсулот

Мисоли таҷрибавӣ

Саволҳои зиёд такрормешуда

Теги Маҳсулот

Вижагиҳо

■ Содда ва зуд: Амплифатсияи ПТР метавонад мустақиман бо истифода аз хун ҳамчун қолаб бидуни қадамҳои дилгиркунандаи омодасозии намуна ва истихроҷи ДНК анҷом дода шавад.
■ Покии баланд: Гузаронидани марҳилаҳои пешакӣ коркард ва истихроҷи ДНК метавонад барои пешгирии олудашавии байнисоҳавии намунаҳо кӯмак расонад.
■ Маҳсулнокии баланд: Идентификатсияи ПТР барои намунаҳои миқёси калон бо роҳи муттаҳид кардани маҷмӯа бо зарринҳои ПТР-и 96/384.
■ Универсалияти қавӣ: Ин маҷмӯа метавонад фрагментҳо ё пораҳои баландтари GC -ро бо сохтори мураккаби дуввум самаранок тақвият диҳад ва дарозии тақвият метавонад то 5 кб бошад.
■ Муқовимати шадид ба стресс: Ин маҷмӯаро барои намудҳои гуногун ва намунаҳои хун, ки бо роҳҳои гуногун ҳифз шудаанд, татбиқ кардан мумкин аст.

Барномаҳо

Маҳсулоти ПТР-и ин маҷмӯа дорои "А" дар охири 3'мебошад, ки онро бевосита барои клон кардани вектори TA истифода бурдан мумкин аст. Ин маҷмӯа метавонад барои тақвияти фрагментҳои геномии ДНК, таҳлили генетикии баландсуръат ва таҳлили генотипсозӣ (ба мисли муайянкунии ген) истифода шавад.

Ҳама маҳсулотро барои ODM/OEM фармоиш додан мумкин аст. Барои тафсилот,лутфан Хадамоти фармоишӣ (ODM/OEM) -ро клик кунед

Гузашта: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Баъдӣ: Маҷмӯи мустақими бофтаи муш

	Бо истифода аз антикоагулятсияи EDTA -и инсон, 4 ген бо мазмуни гуногуни GC аз ҷониби Blood Direct PCR Kit тақвият дода шуданд. Системаи реаксияи ПТР 20 мкл буд ва 1 мкл хун ҳамчун шаблон истифода мешуд. М: Тянган Маркер II; 1: Андозаи порча 1090 bp, мазмуни GC 68.1%; 2: Андозаи порчаҳо 1915 bp, мазмуни GC 70,4%; 3: Андозаи порча 448 bp, мазмуни GC 74,8%; 4: Андозаи порча 1527 bp, мундариҷаи GC 61,5%. Натиҷаҳои таҷрибавӣ: Blood Direct PCR метавонад фрагментҳои ДНК-ро бо мундариҷаи GC дар ҳудуди 61,5%-74,8%тақвият бахшад ва ишора мекунад, ки он қодир аст порчаҳои GC-ро баланд бардорад.
	Бо истифода аз антикоагулятсияи EDTA -и инсон, 5 ген бо дарозии гуногун (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 ва Hn4.0) аз ҷониби Blood Direct PCR Kit тақвият дода шуданд. Системаи реаксияи ПТР 20 мкл буд ва 1 мкл хун ҳамчун шаблон истифода мешуд. М: Тянган Маркер II; 1-3: 3 намунаҳои гуногуни хун; NTC: назорат бе праймерҳо. Натиҷаҳои таҷрибавӣ: Маҷмӯи ПХР -и мустақим метавонад порчаҳоро бо дарозии то 4 кб афзоиш диҳад ва аз он шаҳодат медиҳад, ки он қодир аст порчаҳои дарозро тақвият диҳад.
	Бо истифода аз антикоагулятсияи EDTA -и инсон, маҷмӯи Blood Direct PCR барои муайян кардани PCR намунаҳои гуногуни хун истифода шудааст. Системаи реаксияи ПТР 20 мкл буд ва 1 мкл хун ҳамчун шаблон истифода мешуд. М: Тянган Маркер II; 1-9: миқдори боркунии хун мутаносибан 0,1 мкл, 0,2 мкл, 0,3 мкл, 0,4 мкл, 1 мкл, 2 мкл, 3 мкл, 4 мкл ва 5 мкл; NTC: назорат бе шаблон Натиҷаҳои таҷрибавӣ: Маҷмӯи ПХР-и мустақим ба хун муқовимати қавӣ дорад ва метавонад намунаҳои хунро бо диапазони боркунии 0.1-5 мкл афзоиш диҳад.
	Намунаҳои хун аз одамон, каламушҳо, мурғ ва дигар намудҳои табобати гуногун ба сифати қолабҳо истифода шуданд. Kit Blood Direct PCR барои тақвият додани PRNP (инсон, 750 bp), Actin (каламуш, 200 bp) ва β-Actin (Chicken, 1.0 kb) истифода шудааст. Системаи реаксияи ПТР 20 мкл буд ва 1 мкл хун ҳамчун шаблон истифода мешуд. М: Тянген Маркер II. Натиҷаҳои таҷрибавӣ: Маҷмӯи ПХР -ро дар доираи васеи намунаҳо татбиқ кардан мумкин аст ва ошкоркунии мустақими ПТР -ро дар намунаҳои хуни намудҳои гуногун бо табобатҳои гуногун гузаронидан мумкин аст.

Савол: Бандҳои тақвиятдиҳанда вуҷуд надоранд

Шаблон A-1

■ Шаблон дорои омехтаҳои сафеда ё ингибиторҳои Taq ва ғайра мебошад. - Шаблон ДНК -ро тоза кунед, наҷосати сафедаҳоро хориҷ кунед ё ДНК -и шаблонро бо маҷмӯаҳои тозакунӣ истихроҷ кунед.

■ Денатуратсияи шаблон пурра нест - —Мувофиқ ҳарорати денатуратсияро зиёд кунед ва вақти денатуратсияро дароз кунед.

■ Таназзули шаблон ——Шаблонаро аз нав омода кунед.

Праймер А-2

■ Сифати пасти праймерҳо --— Праймерро аз нав синтез кунед.

■ Таназзули праймерҳо - - Примерҳои консентратсияи баландро барои нигоҳдорӣ ба ҳаҷми хурд ҷудо кунед. Аз яхкунӣ ва обшавии сершумор ё криоконсерви дарозмуддати 4 ° C пешгирӣ кунед.

■ Тарҳи нодурусти праймерҳо (масалан, дарозии праймер кофӣ нест, димер байни праймерҳо ва ғайра ба вуҷуд омадааст) -Праймерҳои навро тарҳрезӣ кунед (аз ташаккули димер ва сохтори дуввум канорагирӣ кунед)

A-3 мг²⁺тамаркуз

■ Мг²⁺ консентратсия хеле паст аст - - Ба таври мунтазам зиёд кардани Mg²⁺консентратсия: оптимизатсияи Mg²⁺ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg²⁺ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.

A-4 Ҳарорати гармкунӣ

■ Ҳарорати баланди гармкунӣ ба бастани праймер ва шаблон таъсир мерасонад. ——Ҳарорати пӯстро паст кунед ва вазъро бо градиенти 2 ° C оптимизатсия кунед.

Мӯҳлати тамдиди A-5

■ Мӯҳлати тамдиди кӯтоҳ —— Мӯҳлати тамдидро зиёд кунед.

Савол: Позитивии бардурӯғ

Ҳодисаҳо: Намунаҳои манфӣ инчунин гурӯҳҳои пайдарпайии мақсаднокро нишон медиҳанд.

A-1 олудашавии ПТР

■ Ифлосшавии байниҳамдигарии пайдарпаии мақсаднок ё маҳсулоти тақвиятдиҳанда - - Эҳтиёт накунед, ки намунаи дорои пайдарпаии мақсаднокро дар намунаи манфӣ пошед ё аз қубури центрифуга рехт. Реагентҳо ё таҷҳизот бояд барои нест кардани кислотаҳои мавҷудаи нуклеинӣ автоклав карда шаванд ва мавҷудияти олудашавӣ тавассути таҷрибаҳои манфии назорат муайян карда шавад.

■ Ифлосшавии реагентҳо - Реагентҳоро ҷобаҷо кунед ва дар ҳарорати паст нигоҳ доред.

A-2 Сарвазириr

■ Мг²⁺ консентратсия хеле паст аст - - Ба таври мунтазам зиёд кардани Mg²⁺ консентратсия: оптимизатсияи Mg²⁺ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg²⁺ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.

■ Тарҳи нодурусти праймер ва пайдарпаии ҳадаф дорои гомология бо пайдарпаии ғайри ҳадафӣ мебошад. —— Праймерҳои дубора тарҳрезишуда.

Савол: Тақвияти ғайри мушаххас

Ҳодисаҳо: Бандҳои тақвияти ПТР бо андозаи пешбинишуда номувофиқанд, ё калон ё хурд, ё баъзан ҳарду бандҳои махсуси тақвиятдиҳанда ва бандҳои тақвиятдиҳандаи ғайрихусусӣ ба амал меоянд.

Праймер А-1

■ Хусусияти заифи ибтидоӣ

—— Праймерро аз нав сохтан.

■ Консентратсияи праймер хеле баланд аст.

А-2 мг²⁺ тамаркуз

■ Мг²⁺ консентратсия хеле баланд аст - - Консентратсияи Mg2+ -ро дуруст кам кунед: Mg -ро оптимизатсия кунед²⁺ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg²⁺ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.

А-3 полимеразаи термостабил

■ Миқдори аз ҳад зиёди фермент - Миқдори ферментро дар фосилаи 0,5 U кам кунед.

A-4 Ҳарорати гармкунӣ

■ Ҳарорати пӯст хеле паст аст--Ҳарорати пӯстро ба таври мувофиқ баланд бардоред ё усули думарҳилавии пухтупазро қабул кунед

Давраҳои PCR A-5

■ Аз ҳад зиёд давраҳои ПТР - Шумораи давраҳои ПТР -ро кам кунед.

Савол: Бандҳои часпак ё лой

Праймер А-1—— Хусусияти заиф ——Аз нав тарҳрезии праймер, тағир додани мавқеъ ва дарозии праймер барои баланд бардоштани хусусияти он; ё анҷом додани ПТР -и лона.

Шаблон A-2 ДНК

—— Шаблон пок нест - Шаблонро тоза кунед ё ДНК -ро бо маҷмӯаҳои тозакунӣ истихроҷ кунед.

A-3 мг²⁺ тамаркуз

—-Мг²⁺ консентратсия хеле баланд аст - - Mg -ро дуруст кам кунед²⁺ консентратсия: оптимизатсияи Mg²⁺ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg²⁺ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.

A-4 dNTP

—- Консентратсияи dNTPs хеле баланд аст - Консентратсияи dNTP -ро ба таври мувофиқ кам кунед

A-5 Ҳарорати гармкунӣ

——Харорати пухта хеле паст — —Харорати пухтанро ба таври бояду шояд баланд бардоред

Давраҳои A-6

——Дар бисёр давраҳо —Рақами давраро оптимизатсия кунед

Савол: Дар системаи реаксияи 50 мкл ПТР чӣ қадар шаблон ДНК бояд илова карда шавад?

Савол: Чӣ тавр пораҳои дарозро васеъ кардан мумкин аст?

Қадами аввал интихоби полимеразаи мувофиқ аст. Полимеразаи муқаррарии Taq бинобар набудани фаъолияти экзонуклеазаи 3'-5 'таҳрир карда наметавонад ва номувофиқатӣ самаранокии паҳншавии порчаҳоро хеле коҳиш медиҳад. Аз ин рӯ, полимеразаи муқаррарии Taq наметавонад фрагментҳои мақсадноки аз 5 кб калонро самаранок тақвият диҳад. Так полимеразаи дорои тағироти махсус ё дигар полимеразаи боэътимод бояд барои беҳтар кардани самаранокии васеъшавӣ ва қонеъ кардани ниёзҳои тақвияти фрагментҳои дароз интихоб карда шавад. Илова бар ин, тақвияти порчаҳои дароз инчунин тасҳеҳи мувофиқи тарҳи праймер, вақти денатуратсия, вақти тамдид, pH буферӣ ва ғайраҳоро талаб мекунад. Бо мақсади пешгирии вайроншавии шаблон, вақти денатуратсия дар 94 ° C бояд то 30 сония ё камтар дар як давра кам карда шавад ва вақти баландшавии ҳарорат то 94 ° C пеш аз тақвият бояд камтар аз 1 дақиқа бошад. Ғайр аз он, муқаррар кардани ҳарорати васеъкунӣ дар тақрибан 68 ° C ва тарҳрезии вақти тамдид аз рӯи суръати 1 кб/дақиқа метавонад тақвияти муассири пораҳои дарозро таъмин кунад.

Савол: Чӣ тавр дурустии тақвияти ПТР -ро беҳтар кардан мумкин аст?

Сатҳи хатогии тақвияти ПТР метавонад бо истифода аз полимеразаҳои гуногуни ДНК бо садоқати баланд кам карда шавад. Дар байни ҳама полимеразаҳои Taq DNA, ки то имрӯз пайдо шудаанд, ферменти Pfu дорои сатҳи пасттарин хато ва садоқати баландтарин аст (ба ҷадвали замимашуда нигаред). Илова ба интихоби фермент, муҳаққиқон метавонанд суръати мутацияи ПТР -ро тавассути оптимизатсияи шароити реаксия, аз ҷумла оптимизатсияи таркиби буферӣ, консентратсияи полимеразаи термостабилизатсия ва оптимизатсияи рақами сикли ПТР боз ҳам коҳиш диҳанд.

Паёми худро дар ин ҷо нависед ва ба мо фиристед

Категорияҳои маҳсулот

Чаро моро интихоб кунед

Аз замони таъсисёбӣ заводи мо бо риояи принсип маҳсулоти аввалини ҷаҳонро таҳия карда истодааст
пеш аз ҳама сифат. Маҳсулотҳои мо дар соҳа обрӯи олӣ ва эътимоднок дар байни муштариёни нав ва кӯҳна пайдо кардаанд.

ПУРСИШ