2 × Taq Platinum PCR Mix
Таърифи фаъолият
Фаъолияти 1 воҳиди (U) Taq Platinum DNA Polymerase ҳамчун миқдори ферменте муайян карда мешавад, ки барои дохил кардани 10 nmol дезоксинуклеотидҳо ба моддаҳои кислотаҳо дар 74 ° C дар давоми 30 дақиқа бо истифода аз ДНК-и нутфа фаъолшуда ҳамчун шаблон/праймер лозим аст.
Назорати сифат
Покӣ тавассути ошкоркунии SDS-PAGE зиёда аз 99%аст; Ягон фаъолияти нуклеазаи экзогенӣ муайян карда намешавад; Гени як нусха дар геномҳои инсон метавонад самаранок такмил дода шавад; Ҳангоми дар ҳарорати хонагӣ дар давоми як ҳафта нигоҳ доштани фаъолияти фаъол тағйироти назаррасе ба амал намеояд.
Параметрҳои асосии техникӣ
Он дорои 5'-3 "экзонуклеаза ва 3'-5" экзонуклеаза мебошад ва садоқати он дар паҳлӯи полимеразаи Pfu аст. Суръати тамдиди Taq Platinum Polymerase нисбат ба полимеразаи Pfu тезтар аст ва самаранокии тақвият баландтар аст. Маҳсулоти ПТР -ро мустақиман ба канори кунҷ пайваст кардан ё бо вектори TA клон кардан мумкин аст. Агар самаранокии клонизатсия такмил дода шавад, тавсия дода мешавад, ки пеш аз клон кардан ба вектори TA аввал тозакунӣ ва иловаҳои 3'-dA илова карда шавад.
Як қубур Taq Platinum MasterMix (Сертификатсияи миллии баландтехнологӣ)
■ Taq Platinum MasterMix мушаххасот ва ҳассосияти реаксияи ПТР -ро такмил дод ва метавонад қолабҳои мураккабро бо мазмуни баланди GC, сохтори дуввум ва амсоли инҳо афзоиш диҳад. То 2 нусхаи шаблонаи мақсаднокро метавон афзоиш дод, ки натиҷаҳои дақиқтари озмоиширо таъмин мекунад.
■ Формулаи беназири Taq Platinum MasterMix тамоми системаи реаксияро хеле устувор месозад ва ба фаъолият аз такрори яхбандӣ ё нигоҳдории дарозмуддат дар 4 ° C таъсир намерасонад.
■ Ҳалли омехтаи ПТР-и устувор ва муассири қаблан омодашуда метавонад амалиётро зуд ва оддӣ гардонад ва шиддати меҳнат ва хатогии интихобро хеле коҳиш диҳад. Такмилдиҳандаи баландсифати ПТР ва оптимизатор инчунин ба омехта дохил карда шудааст, ки талаботро ба шароити ПТР коҳиш медиҳад.
■ Ин маҳсулот ҳам системаҳои дорои ранг ва ҳам ранг надорад. Маҳсулоти дорои рангҳои MasterMix метавонанд пас аз ПТР бе илова кардани буферии боркунӣ мустақиман электрофорез карда шаванд.
Барномаҳо
Он метавонад полимеразаи Pfu -ро барои тақвият додани маҳсулоти боэътимод аз қолибҳои мураккаб ба монанди геномҳо иваз кунад ва он барои замимаҳо ба монанди клон кардани генҳои ифода, мутатсияҳои ба сайт хос ва таҳлили полиморфизми ягонаи нуклеотид (SNP) ва ғайра мувофиқ аст.
Эҳтиёт дар тарҳрезии праймерҳои PCR:
Дарозии праймер одатан 20-25 мер аст. Бо вуҷуди ин, ҳангоми иҷрои қисмҳои ПГР дарозии праймер бояд ба 30-35 мер зиёд карда шавад.
■ Дар байни ду праймер ягон ҷуфткунии иловагӣ вуҷуд надорад, хусусан барои 3 пойгоҳи охир дар охири 3 ′.
■ Мазмуни GC бояд 50-60%бошад ва аз GC ё AT бойи маҳаллӣ дурӣ ҷӯед. Барои ба таври мӯътадил пайваст кардани праймер ва шаблон, аз сохтори бой дар охири 3 'канорагирӣ кунед.
■ Аз сохтани сохтори дуввум канорагирӣ кунед.
■ Ду праймерро бо ҳарорати Tm ба ҳам наздик интихоб кунед.
Ҳисоб кардани арзиши Tm праймерҳо барои ПТР:
■ Вақте ки праймер камтар аз 20 мер аст: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ Вақте ки праймер зиёда аз 20 мер аст: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/L, ки L ин дарозии праймер аст.
■ Ҳарорати гармкуниро дар (Tm-5) ° C муқаррар кунед.
Вуруди ибтидоии PCR
Консентратсияи ниҳоии праймерҳоро дар байни 0.1 μM ва 1.0 μM интихоб кардан мумкин аст. Консентратсияи хеле пасти праймер боиси ҳосили пасти маҳсулоти тақвиятёбанда мегардад, дар ҳоле ки консентратсияи аз ҳад зиёди праймер ба амплификатсияи мушаххас бештар майл дорад. Одатан, вақте ки миқдори ДНК -и шаблон калон ё мураккаби ДНК -и шаблон аст (масалан ДНК -и геномии инсон) ҳамчун шаблон истифода мешавад, консентратсияи праймер бояд камтар бошад. Вақте ки миқдори шаблон ДНК хурд аст ё ДНК -и шаблонии оддӣ (масалан, ДНК плазмида ва ғайра) ҳамчун шаблон истифода мешавад, консентратсияи праймер бояд баландтар бошад.
Ҳама маҳсулотро барои ODM/OEM фармоиш додан мумкин аст. Барои тафсилот,лутфан Хадамоти фармоишӣ (ODM/OEM) -ро клик кунед
  |
ДНК -и геномиро ҳамчун шаблон барои тақвият додани порчаи 1 кб истифода баред. Пас аз аксуламали PCR, барои муайян кардани электрофорез 5 мкл гиред. |
Шаблон A-1
■ Шаблон дорои омехтаҳои сафеда ё ингибиторҳои Taq ва ғайра мебошад. - Шаблон ДНК -ро тоза кунед, наҷосати сафедаҳоро хориҷ кунед ё ДНК -и шаблонро бо маҷмӯаҳои тозакунӣ истихроҷ кунед.
■ Денатуратсияи шаблон пурра нест - —Мувофиқ ҳарорати денатуратсияро зиёд кунед ва вақти денатуратсияро дароз кунед.
■ Таназзули шаблон ——Шаблонаро аз нав омода кунед.
Праймер А-2
■ Сифати пасти праймерҳо --— Праймерро аз нав синтез кунед.
■ Таназзули праймерҳо - - Примерҳои консентратсияи баландро барои нигоҳдорӣ ба ҳаҷми хурд ҷудо кунед. Аз яхкунӣ ва обшавии сершумор ё криоконсерви дарозмуддати 4 ° C пешгирӣ кунед.
■ Тарҳи нодурусти праймерҳо (масалан, дарозии праймер кофӣ нест, димер байни праймерҳо ва ғайра ба вуҷуд омадааст) -Праймерҳои навро тарҳрезӣ кунед (аз ташаккули димер ва сохтори дуввум канорагирӣ кунед)
A-3 мг2+тамаркуз
■ Мг2+ консентратсия хеле паст аст - - Ба таври мунтазам зиёд кардани Mg2+ консентратсия: оптимизатсияи Mg2+ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg2+ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.
A-4 Ҳарорати гармкунӣ
■ Ҳарорати баланди гармкунӣ ба бастани праймер ва шаблон таъсир мерасонад. ——Ҳарорати пӯстро паст кунед ва вазъро бо градиенти 2 ° C оптимизатсия кунед.
Мӯҳлати тамдиди A-5
■ Мӯҳлати тамдиди кӯтоҳ —— Мӯҳлати тамдидро зиёд кунед.
Ҳодисаҳо: Намунаҳои манфӣ инчунин гурӯҳҳои пайдарпайии мақсаднокро нишон медиҳанд.
A-1 олудашавии ПТР
■ Ифлосшавии байниҳамдигарии пайдарпаии мақсаднок ё маҳсулоти тақвиятдиҳанда - - Эҳтиёт накунед, ки намунаи дорои пайдарпаии мақсаднокро дар намунаи манфӣ пошед ё аз қубури центрифуга рехт. Реагентҳо ё таҷҳизот бояд барои нест кардани кислотаҳои мавҷудаи нуклеинӣ автоклав карда шаванд ва мавҷудияти олудашавӣ тавассути таҷрибаҳои манфии назорат муайян карда шавад.
■ Ифлосшавии реагентҳо - Реагентҳоро ҷобаҷо кунед ва дар ҳарорати паст нигоҳ доред.
A-2 Сарвазириr
■ Мг2+ консентратсия хеле паст аст - - Ба таври мунтазам зиёд кардани Mg2+ консентратсия: оптимизатсияи Mg2+ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg2+ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.
■ Тарҳи нодурусти праймер ва пайдарпаии ҳадаф дорои гомология бо пайдарпаии ғайри ҳадафӣ мебошад. —— Праймерҳои дубора тарҳрезишуда.
Ҳодисаҳо: Бандҳои тақвияти ПТР бо андозаи пешбинишуда номувофиқанд, ё калон ё хурд, ё баъзан ҳарду бандҳои махсуси тақвиятдиҳанда ва бандҳои тақвиятдиҳандаи ғайрихусусӣ ба амал меоянд.
Праймер А-1
■ Хусусияти заифи ибтидоӣ
—— Праймерро аз нав сохтан.
■ Консентратсияи праймер хеле баланд аст.
А-2 мг2+ тамаркуз
■ Мг2+ консентратсия хеле баланд аст - - Консентратсияи Mg2+ -ро дуруст кам кунед: Mg -ро оптимизатсия кунед2+ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg2+ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.
А-3 полимеразаи термостабил
■ Миқдори аз ҳад зиёди фермент - Миқдори ферментро дар фосилаи 0,5 U кам кунед.
A-4 Ҳарорати гармкунӣ
■ Ҳарорати пӯст хеле паст аст--Ҳарорати пӯстро ба таври мувофиқ баланд бардоред ё усули думарҳилавии пухтупазро қабул кунед
Давраҳои PCR A-5
■ Аз ҳад зиёд давраҳои ПТР - Шумораи давраҳои ПТР -ро кам кунед.
Праймер А-1—— Хусусияти заиф ——Аз нав тарҳрезии праймер, тағир додани мавқеъ ва дарозии праймер барои баланд бардоштани хусусияти он; ё анҷом додани ПТР -и лона.
Шаблон A-2 ДНК
—— Шаблон пок нест - Шаблонро тоза кунед ё ДНК -ро бо маҷмӯаҳои тозакунӣ истихроҷ кунед.
A-3 мг2+ тамаркуз
—-Мг2+ консентратсия хеле баланд аст - - Mg -ро дуруст кам кунед2+ консентратсия: оптимизатсияи Mg2+ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg2+ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.
A-4 dNTP
—- Консентратсияи dNTPs хеле баланд аст - Консентратсияи dNTP -ро ба таври мувофиқ кам кунед
A-5 Ҳарорати гармкунӣ
——Харорати пухта хеле паст — —Харорати пухтанро ба таври бояду шояд баланд бардоред
Давраҳои A-6
——Дар бисёр давраҳо —Рақами давраро оптимизатсия кунед
Қадами аввал интихоби полимеразаи мувофиқ аст. Полимеразаи муқаррарии Taq бинобар набудани фаъолияти экзонуклеазаи 3'-5 'таҳрир карда наметавонад ва номувофиқатӣ самаранокии паҳншавии порчаҳоро хеле коҳиш медиҳад. Аз ин рӯ, полимеразаи муқаррарии Taq наметавонад фрагментҳои мақсадноки аз 5 кб калонро самаранок тақвият диҳад. Так полимеразаи дорои тағироти махсус ё дигар полимеразаи боэътимод бояд барои беҳтар кардани самаранокии васеъшавӣ ва қонеъ кардани ниёзҳои тақвияти фрагментҳои дароз интихоб карда шавад. Илова бар ин, тақвияти порчаҳои дароз инчунин тасҳеҳи мувофиқи тарҳи праймер, вақти денатуратсия, вақти тамдид, pH буферӣ ва ғайраҳоро талаб мекунад. Бо мақсади пешгирии вайроншавии шаблон, вақти денатуратсия дар 94 ° C бояд то 30 сония ё камтар дар як давра кам карда шавад ва вақти баландшавии ҳарорат то 94 ° C пеш аз тақвият бояд камтар аз 1 дақиқа бошад. Ғайр аз он, муқаррар кардани ҳарорати васеъкунӣ дар тақрибан 68 ° C ва тарҳрезии вақти тамдид аз рӯи суръати 1 кб/дақиқа метавонад тақвияти муассири пораҳои дарозро таъмин кунад.
Сатҳи хатогии тақвияти ПТР метавонад бо истифода аз полимеразаҳои гуногуни ДНК бо садоқати баланд кам карда шавад. Дар байни ҳама полимеразаҳои Taq DNA, ки то имрӯз пайдо шудаанд, ферменти Pfu дорои сатҳи пасттарин хато ва садоқати баландтарин аст (ба ҷадвали замимашуда нигаред). Илова ба интихоби фермент, муҳаққиқон метавонанд суръати мутацияи ПТР -ро тавассути оптимизатсияи шароити реаксия, аз ҷумла оптимизатсияи таркиби буферӣ, консентратсияи полимеразаи термостабилизатсия ва оптимизатсияи рақами сикли ПТР боз ҳам коҳиш диҳанд.
Категорияҳои маҳсулот
Чаро моро интихоб кунед
Аз замони таъсисёбӣ заводи мо бо риояи принсип маҳсулоти аввалини ҷаҳонро таҳия карда истодааст
пеш аз ҳама сифат. Маҳсулотҳои мо дар соҳа обрӯи олӣ ва эътимоднок дар байни муштариёни нав ва кӯҳна пайдо кардаанд.
- Тел: +86 010-59822688
- Бинои 5, рақами 86, Роҳи Shuangying West, ноҳияи Changping, Пекин.
- people@tiangen.com
