2 × Taq PCR MasterMix

Премикси зуд PCR бо самаранокии баланд ва муқовимати баланд ба стресс.

2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ як премикси нави оптимизатсияшуда ва такмилдодаи 2 × PCR бо ҳама ҷузъҳои муҳим дар реаксияи ПТР ба истиснои шаблон ва праймерҳои ДНК мебошад.

Гурба Не	Андозаи бастабандӣ
4993001	1мл
4993002	5х1мл
4992912	20х5х1 мл
4992913	5 × 1мл
4992920	20 × 5 × 1мл
4992921	20 × 5 × 1мл

Ба мо почтаи электронӣ фиристед

Тафсилоти маҳсулот

Мисоли таҷрибавӣ

Саволҳои зиёд такрормешуда

Теги Маҳсулот

Вижагиҳо

■ Самаранокии баландшавии тақвият: фрагментҳои ДНК -и андозаҳои гуногун (камтар аз 5 кб) ва сарчашмаҳоро метавон самаранок тақвият дод.
■ Ҳассосияти баланд: То 10 pg порчаҳои ҳадафро аз қолабҳои геномӣ зиёд кардан мумкин аст.
■ Муқовимати баланд ба фишор: Барои шаблонҳои дорои миқдори зиёди ифлосшавӣ ба монанди қолаби истифоданашуда/фарҳанги бактериявӣ, порчаи ҳадафро метавон ба осонӣ такмил дод. Ба яхбандӣ ва обшавии такрорӣ ба фаъолияти полимераза таъсир намерасонад.
■ Барои барномаҳо қулай аст: Системаи реаксия ба осонӣ ва зуд омода карда шуд. Қисмати тақвиятёфта дорои 3 ′ end dA-overhang аст, ки барои клонкунии TA қулай аст.

Мушаххасот

Навъи: Taq DNA полимераз
Намуна: Шаблон тоза/ноҳамвор истихроҷшуда/фарҳанги бактериявӣ
Шаблон: > 10 саҳ
Андозаи порча: <5 кб
Барномаҳо: Тақвияти ПРР-и пораҳои ДНК, нишонгузории ДНК, васеъкунии праймер, муайянкунии пайдарпайӣ, муайянкунии генҳои миқёси калон, таҷрибаҳои ним-миқдории ПТР, ошкор кардани ДНК-и микроэлементҳо ва ғайра.

Ҳама маҳсулотро барои ODM/OEM фармоиш додан мумкин аст. Барои тафсилот,лутфан Хадамоти фармоишӣ (ODM/OEM) -ро клик кунед

Гузашта: 2 × омехтаи PCR-бойи GC

Баъдӣ: Системаи тиллоӣ ПТР (бо ранг)

Тасвири 1. Шаблонҳо аз сарчашмаҳои гуногун аз ҷониби TIANGEN Taq MasterMix II ва Taq Mix -и умумӣ аз Таъминкунанда TR мутаносибан барои муайян кардани муқовимати стресс ба реагентҳо тақвият дода шуданд. Натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки маҳсулоти TIANGEN метавонанд фрагментҳои мавриди ҳадафро аз қолабҳои хоми геномӣ ва фарҳанги бактерияҳо тақвият диҳанд ва муқовимати стресс нисбат ба таъминкунандаи TR беҳтар аст. A: Шаблон хоми геномии аз ҷониби TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit гирифташуда. Prp/DN: Истихроҷи хом ва ошкор кардани намунаҳои хуни инсон. Райс: Истихроҷи хом ва кашфи намунаҳои биринҷ. Б: Колонияи ПТР. Қисмати PCR 700 bp аст.
М: Тянген Маркер III

Универсалияти хуб барои қолабҳо аз сарчашмаҳои гуногун ва дарозии гуногун
Тасвири 2. Қисмҳои сарчашмаҳо ва дарозии гуногун бо ёрии TIANGEN тақвият дода шуданд Тақ MasterMix II (A) ва оддӣ Тақ Омехтаи таъминкунанда TK (B), Таҳвилгари TR (C), Таъминкунандаи V (D) ва Таъминкунандаи G (E) мутаносибан. Натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки иҷрои ҳамаҷонибаи маҳсулоти TIANGEN аз ҷиҳати қобилият, хосиятнокӣ ва универсалӣ беҳтарин аст.

2-3: Шаблон ДНК-и геномии биринҷ (694 bp, 2258 bp);

4: Шаблон геномии генетикии пахта (200 bp);

5: Escherichia coli қолаби геномии ДНК (2298 bp);

6-7: Шаблон ДНК-и геномии муш (1 кб, 2 кб);

8-10: Шаблон геномии генетикии каламушҳо (1 кб, 2 кб, 2080 bp);

11-18: Шаблон ДНК-и геномии инсон (300 bp, 448 bp (GC%: 74,8%), 1100 bp, 750 bp,

1000 нуқта, 1090 фишор (GC%: 70,4%), 2 кб, 4 кб)

Ҳассосияти баланд
Тасвири 3. Консентратсияҳои гуногуни фрагментҳои фрагментҳо ва ДНК -и инсон бо ёрии TIANGEN тақвият дода шуданд Тақ MasterMix II (A), оддӣ Тақ Омезиши Таъминкунандаи V (B) ва Таъминкунандаи TK (C), мутаносибан, барои ҳассосияти тақвиятдиҳанда. Натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки маҳсулоти TIANGEN метавонад порчаи мақсадноки шаблонҳои геномиро то 0.01 нг афзоиш диҳад ва ҳассосияти он нисбат ба маҳсулоти таъминкунандаи V ва TK.M беҳтар аст: TIANGEN Marker III, N: NTCTemplate вуруди 1-8 : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0.1 ng, 0.01 ng.

Савол: Бандҳои тақвиятдиҳанда вуҷуд надоранд

Шаблон A-1

■ Шаблон дорои омехтаҳои сафеда ё ингибиторҳои Taq ва ғайра мебошад. - Шаблон ДНК -ро тоза кунед, наҷосати сафедаҳоро хориҷ кунед ё ДНК -и шаблонро бо маҷмӯаҳои тозакунӣ истихроҷ кунед.

■ Денатуратсияи шаблон пурра нест - —Мувофиқ ҳарорати денатуратсияро зиёд кунед ва вақти денатуратсияро дароз кунед.

■ Таназзули шаблон ——Шаблонаро аз нав омода кунед.

Праймер А-2

■ Сифати пасти праймерҳо --— Праймерро аз нав синтез кунед.

■ Таназзули праймерҳо - - Примерҳои консентратсияи баландро барои нигоҳдорӣ ба ҳаҷми хурд ҷудо кунед. Аз яхкунӣ ва обшавии сершумор ё криоконсерви дарозмуддати 4 ° C пешгирӣ кунед.

■ Тарҳи нодурусти праймерҳо (масалан, дарозии праймер кофӣ нест, димер байни праймерҳо ва ғайра ба вуҷуд омадааст) -Праймерҳои навро тарҳрезӣ кунед (аз ташаккули димер ва сохтори дуввум канорагирӣ кунед)

A-3 мг²⁺тамаркуз

■ Мг²⁺ консентратсия хеле паст аст - - Ба таври мунтазам зиёд кардани Mg²⁺консентратсия: оптимизатсияи Mg²⁺ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg²⁺ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.

A-4 Ҳарорати гармкунӣ

■ Ҳарорати баланди гармкунӣ ба бастани праймер ва шаблон таъсир мерасонад. ——Ҳарорати пӯстро паст кунед ва вазъро бо градиенти 2 ° C оптимизатсия кунед.

Мӯҳлати тамдиди A-5

■ Мӯҳлати тамдиди кӯтоҳ —— Мӯҳлати тамдидро зиёд кунед.

Савол: Позитивии бардурӯғ

Ҳодисаҳо: Намунаҳои манфӣ инчунин гурӯҳҳои пайдарпайии мақсаднокро нишон медиҳанд.

A-1 олудашавии ПТР

■ Ифлосшавии байниҳамдигарии пайдарпаии мақсаднок ё маҳсулоти тақвиятдиҳанда - - Эҳтиёт накунед, ки намунаи дорои пайдарпаии мақсаднокро дар намунаи манфӣ пошед ё аз қубури центрифуга рехт. Реагентҳо ё таҷҳизот бояд барои нест кардани кислотаҳои мавҷудаи нуклеинӣ автоклав карда шаванд ва мавҷудияти олудашавӣ тавассути таҷрибаҳои манфии назорат муайян карда шавад.

■ Ифлосшавии реагентҳо - Реагентҳоро ҷобаҷо кунед ва дар ҳарорати паст нигоҳ доред.

A-2 Сарвазириr

■ Мг²⁺ консентратсия хеле паст аст - - Ба таври мунтазам зиёд кардани Mg²⁺ консентратсия: оптимизатсияи Mg²⁺ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg²⁺ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.

■ Тарҳи нодурусти праймер ва пайдарпаии ҳадаф дорои гомология бо пайдарпаии ғайри ҳадафӣ мебошад. —— Праймерҳои дубора тарҳрезишуда.

Савол: Тақвияти ғайри мушаххас

Ҳодисаҳо: Бандҳои тақвияти ПТР бо андозаи пешбинишуда номувофиқанд, ё калон ё хурд, ё баъзан ҳарду бандҳои махсуси тақвиятдиҳанда ва бандҳои тақвиятдиҳандаи ғайрихусусӣ ба амал меоянд.

Праймер А-1

■ Хусусияти заифи ибтидоӣ

—— Праймерро аз нав сохтан.

■ Консентратсияи праймер хеле баланд аст.

А-2 мг²⁺ тамаркуз

■ Мг²⁺ консентратсия хеле баланд аст - - Консентратсияи Mg2+ -ро дуруст кам кунед: Mg -ро оптимизатсия кунед²⁺ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg²⁺ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.

А-3 полимеразаи термостабил

■ Миқдори аз ҳад зиёди фермент - Миқдори ферментро дар фосилаи 0,5 U кам кунед.

A-4 Ҳарорати гармкунӣ

■ Ҳарорати пӯст хеле паст аст--Ҳарорати пӯстро ба таври мувофиқ баланд бардоред ё усули думарҳилавии пухтупазро қабул кунед

Давраҳои PCR A-5

■ Аз ҳад зиёд давраҳои ПТР - Шумораи давраҳои ПТР -ро кам кунед.

Савол: Бандҳои часпак ё лой

Праймер А-1—— Хусусияти заиф ——Аз нав тарҳрезии праймер, тағир додани мавқеъ ва дарозии праймер барои баланд бардоштани хусусияти он; ё анҷом додани ПТР -и лона.

Шаблон A-2 ДНК

—— Шаблон пок нест - Шаблонро тоза кунед ё ДНК -ро бо маҷмӯаҳои тозакунӣ истихроҷ кунед.

A-3 мг²⁺ тамаркуз

—-Мг²⁺ консентратсия хеле баланд аст - - Mg -ро дуруст кам кунед²⁺ консентратсия: оптимизатсияи Mg²⁺ консентратсия бо як қатор реаксияҳо аз 1 мм то 3 мм бо фосилаи 0,5 мм барои муайян кардани оптималии Mg²⁺ консентратсия барои ҳар як шаблон ва праймер.

A-4 dNTP

—- Консентратсияи dNTPs хеле баланд аст - Консентратсияи dNTP -ро ба таври мувофиқ кам кунед

A-5 Ҳарорати гармкунӣ

——Харорати пухта хеле паст — —Харорати пухтанро ба таври бояду шояд баланд бардоред

Давраҳои A-6

——Дар бисёр давраҳо —Рақами давраро оптимизатсия кунед

Савол: Дар системаи реаксияи 50 мкл ПТР чӣ қадар шаблон ДНК бояд илова карда шавад?

Савол: Чӣ тавр пораҳои дарозро васеъ кардан мумкин аст?

Қадами аввал интихоби полимеразаи мувофиқ аст. Полимеразаи муқаррарии Taq бинобар набудани фаъолияти экзонуклеазаи 3'-5 'таҳрир карда наметавонад ва номувофиқатӣ самаранокии паҳншавии порчаҳоро хеле коҳиш медиҳад. Аз ин рӯ, полимеразаи муқаррарии Taq наметавонад фрагментҳои мақсадноки аз 5 кб калонро самаранок тақвият диҳад. Так полимеразаи дорои тағироти махсус ё дигар полимеразаи боэътимод бояд барои беҳтар кардани самаранокии васеъшавӣ ва қонеъ кардани ниёзҳои тақвияти фрагментҳои дароз интихоб карда шавад. Илова бар ин, тақвияти порчаҳои дароз инчунин тасҳеҳи мувофиқи тарҳи праймер, вақти денатуратсия, вақти тамдид, pH буферӣ ва ғайраҳоро талаб мекунад. Бо мақсади пешгирии вайроншавии шаблон, вақти денатуратсия дар 94 ° C бояд то 30 сония ё камтар дар як давра кам карда шавад ва вақти баландшавии ҳарорат то 94 ° C пеш аз тақвият бояд камтар аз 1 дақиқа бошад. Ғайр аз он, муқаррар кардани ҳарорати васеъкунӣ дар тақрибан 68 ° C ва тарҳрезии вақти тамдид аз рӯи суръати 1 кб/дақиқа метавонад тақвияти муассири пораҳои дарозро таъмин кунад.

Савол: Чӣ тавр дурустии тақвияти ПТР -ро беҳтар кардан мумкин аст?

Сатҳи хатогии тақвияти ПТР метавонад бо истифода аз полимеразаҳои гуногуни ДНК бо садоқати баланд кам карда шавад. Дар байни ҳама полимеразаҳои Taq DNA, ки то имрӯз пайдо шудаанд, ферменти Pfu дорои сатҳи пасттарин хато ва садоқати баландтарин аст (ба ҷадвали замимашуда нигаред). Илова ба интихоби фермент, муҳаққиқон метавонанд суръати мутацияи ПТР -ро тавассути оптимизатсияи шароити реаксия, аз ҷумла оптимизатсияи таркиби буферӣ, консентратсияи полимеразаи термостабилизатсия ва оптимизатсияи рақами сикли ПТР боз ҳам коҳиш диҳанд.

Паёми худро дар ин ҷо нависед ва ба мо фиристед